La introducción de muestras en cromatografía ultrarrápida es un tema bastante interesante para el químico. A menudo, este paso se considera uno de los pasos más críticos en el proceso de purificación.
Comenzando con el objetivo principal de la cromatografía ultrarrápida : separar y purificar compuestos de la mejor manera posible, tiene mucho que ver con el potencial de pérdida de muestra. Un momento complicado. La forma en que introduce su muestra en un sistema de cromatografía flash es clave y puede ayudar a minimizar la pérdida de muestra, si lo hace correctamente.
En términos generales, la carga de muestra líquida , también conocida como carga húmeda, y la carga de muestra seca son las dos técnicas disponibles para introducir una muestra en cromatografía ultrarrápida. Cada uno de ellos con sus propios aspectos especiales a considerar.
Carga de muestras húmedas / líquidas
Cuando tiene una muestra líquida, generalmente se introduce con la ayuda de una jeringa directamente en la parte superior del cartucho flash o mediante una válvula de introducción de muestra dedicada.
La carga húmeda se considera la forma más fácil y rápida de introducir una muestra en un sistema de cromatografía ultrarrápida. Aún así, el potencial de pérdida de muestra no es exactamente inexistente. Tenga en cuenta las siguientes cosas, en caso de que decida optar por la carga húmeda de su muestra:
â—¾Solubilidad de los compuestos en la fase móvil inicial : es importante saber cómo se comportarán los compuestos en la solución de muestra una vez que se introduzcan en la muestra. No es raro ver que las condiciones iniciales del gradiente de fase móvil son menos polares que el disolvente de disolución de la muestra. Puede suceder que algunos o incluso todos los componentes de la muestra no se disuelvan en estas condiciones iniciales y precipiten en el sistema de inyección o en la parte superior de la columna. Esto podría crear una presión excesiva en el sistema y provocar una eventual pérdida de muestra.
â—¾Polaridad del disolvente de disolución : si se utilizan disolventes polares para disolver la muestra, pueden adsorberse en la matriz del cartucho de sílice polar y afectar negativamente la separación de compuestos más polares (compuestos que eluyen más tarde en un material de sílice).
â—¾Volumen de la muestra de disolvente : cuanto mayor sea el volumen de la muestra, mayor será el riesgo de que se produzca el fenómeno mencionado anteriormente. Además, la fuerza del solvente de la muestra podría convertirse en una razón para que los compuestos comiencen a migrar al lecho de empaque desde el principio, causando un ensanchamiento de la banda y una resolución reducida.
En muchos casos, no nos quedan muchas opciones sobre cómo superar los problemas potenciales y la pérdida de muestra de la carga de líquido. Para aquellos de ustedes que se encuentren en una situación similar, siga la regla → En caso de duda, opte por la carga de muestra seca.
Carga de muestra seca
Por lo general, la muestra disuelta se mezcla con un adsorbente sólido (muy a menudo sílice ). La combinación se evapora hasta obtener un polvo seco. Luego, el polvo seco se transfiere a un recipiente vacío y se coloca frente al cartucho flash real.
Los compuestos adsorbidos se transfieren luego gradualmente al cartucho de separación dependiendo de la composición de la fase móvil que pasa.
Si tenemos que comparar la carga seca y líquida, la carga de muestra seca es la técnica que típicamente muestra una separación mejorada . Sin embargo, un peligro potencial podría convertirse en el uso excesivo del adsorbente. En ese caso, la muestra se "diluye" en la cantidad redundante de adsorbente, lo que probablemente resultará en una menor separación.
Denoulet Bart
Texto extraído del Blog de Bart de BUCHI. Para mas información acceda al Blog original haciendo clic
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