Consideraciones para su equipo para la liofilización de kits de diagnóstico de PCR.
Es bastante obvio que casi todo lo que debe considerar con respecto a su equipo de liofilización y el proceso para los kits de diagnóstico de PCR se rige por el tamaño pequeño de los lotes de reactivos. Estos tienden a estar en microlitros, por lo que puede deshacerse de la proporción típica de 1: 1 entre la superficie del estante y el área de la superficie del condensador de hielo. También podemos recomendarte lo siguiente:
â—¾Use estantes calentables: esto se debe a que la superficie de los tubos no es ideal para un suministro de calor uniforme. Al liofilizar una placa de 96 pocillos, se encuentra con el problema de trabajar con tubos de plástico con una superficie mínima que está en contacto con el estante del liofilizador. Para tratar de reducir el impacto negativo del área de superficie reducida, puede intentar usar bloques de enfriamiento de aluminio para aumentar la transferencia de calor por conducción. Recomendaría usar de 4 a 6 estantes para esta aplicación.
â—¾Evite los condensadores grandes: dado que no es necesario sublimar mucha agua, considere usar un condensador más pequeño, como uno con capacidad de 6 litros. Evitar las unidades de gran tamaño reduce el costo energético y ambiental del proceso de liofilización y elimina la necesidad de sistemas de agua de refrigeración.
â—¾Tape sus reactivos de PCR liofilizados y kits de diagnóstico: dado que se trata de muestras altamente higroscópicas, debe sellarlas al final para evitar la exposición a la humedad ambiental. Intente trabajar en una habitación con humedad controlada para retardar la reabsorción de la humedad. Para el almacenamiento y transporte, selle sus productos en recipientes a prueba de humedad, como una bolsa de aluminio.
â—¾Use presión para la determinación del punto final: dado que el tamaño de la muestra del producto está en el rango de microlitros, es muy difícil usar sondas de producto para la determinación del punto final. En su lugar, considere usar la prueba de diferencia de presión como indicador. Para obtener más información sobre el uso de la presión como criterio de determinación del punto final, consulte mi publicación anterior en el blog sobre el tema.
Consideraciones para su método de liofilización de kits de diagnóstico de PCR
â—¾No omita el paso de secado secundario: durante esta parte del proceso, elimina la mayor cantidad de agua posible, que es el objetivo de realizar esta técnica en primer lugar.
â—¾Apunte a un contenido de humedad final en el rango de 1-3%: Esto reitera mi primer punto. Para lograr este rango, necesitará una fase de secado secundaria una vez que todo el hielo se haya sublimado. También recomendaría medir la humedad utilizando la titulación Karl-Fisher. Solo como nota al margen, existen otros métodos, como el mapeo de humedad del método de liofilización, lea sobre los de mi publicación anterior en el blog.
â—¾Optimice la estabilidad de la formulación con reactivos adicionales: considere el uso de excipientes, como agentes de carga, para estabilizar soluciones con bajo contenido de sólidos. Para aumentar la temperatura del estante para un secado por congelación más seguro y rápido de los kits de diagnóstico de PCR, intente agregar modificadores de temperatura de colapso a su muestra.
â—¾Haga que los ajustes de vacío más altos funcionen para usted: la transferencia de calor por convección es importante en la liofilización, particularmente para lograr una distribución uniforme del calor en el estante y para mitigar el efecto de borde causado por las diferencias en la transferencia de calor radiante. Normalmente, recomendaría usar configuraciones de vacío ligeramente más altas, como 100 mTorrs en lugar de 60 mTorr, para lograr un lote más homogéneo. Sin embargo, muchos reactivos de PCR tienen temperaturas de fusión / colapso muy bajas, por lo que es posible que no siempre sea factible un ajuste de vacío más alto durante la liofilización de los kits de diagnóstico de PCR. Pero si está comprometido con la idea, puede agregar excipientes a la mezcla de PCR, que aumentan la temperatura de colapso y permiten el uso de configuraciones de vacío más altas. Me gustaría señalar un beneficio adicional, principalmente que los ajustes de vacío más altos también reducen la posibilidad de un flujo de vapor ahogado al condensador.
Si desea ampliar su proceso, podría pensar en utilizar ensayos en formato de perlas liofilizadas, que aportan varias ventajas a la mesa. Estas formulaciones ofrecen gránulos homogéneos con densidad controlada y distribución de tamaño de partícula pequeña. De hecho, cada perla contiene un volumen específico de reactivo. Con las mezclas liofilizadas, elimina la formación de alícuotas, la congelación-descongelación y el pipeteo, todo lo cual reduce los errores y mejora la eficiencia de uso. Los productos liofilizados también se pueden reconstituir rápidamente y se pueden liofilizar grandes cantidades de perlas simultáneamente para permitir la producción a gran escala en una unidad de laboratorio de I + D.
Denoulet Bart
Texto extraído del Blog de Bart de BUCHI. Para mas información acceda al Blog original haciendo clic
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